编者按
随着慢性乙型肝炎（CHB）抗病毒治疗意识的增强和抗病毒药物的进展，我国CHB治疗覆盖率和治疗有效率正不断提升，多数CHB患者可获得良好的病毒学应答。如何进一步提升临床治愈的成功率，改善长期预后已经成为目前CHB个体化全程管理中更为关注的问题。我国四川大学华西医院感染性疾病中心唐红教授团队长期致力于以慢乙肝为代表的病毒性肝炎及慢性肝病的诊疗管理和基础研究，在探索临床治愈的新方案和降低患者肝纤维化、肝硬化发生等方面进行了一系列研究工作。在刚刚结束的2022美国肝病研究学会（AASLD）年会上，唐红教授团队在CHB、脂肪肝、丙型肝炎等领域的多项研究被大会收录，其中有两项针对目前CHB及纤维化相关的热点问题进行了壁报交流。本刊特邀唐红教授就这两项研究作详细介绍。
研究一
肠道菌群对poly（I:C）抑制HBV复制的影响及机制研究（大会摘要号：1200）
聚乙二醇化干扰素α（Peg-IFNα）在治疗CHB方面具备有限疗程和较好的实现临床治愈的优点，所以在抗病毒治疗中发挥着至关重要的作用。但是即使严格筛选干扰素（IFN）治疗的对象，接受其治疗的患者乙肝表面抗原转阴率仍不理想，且影响CHB患者对IFN治疗应答不佳的机制尚不十分明确。改善对基于IFN的治疗的反应仍然是CHB患者管理中的一个重要问题。
IFN在机体内可通过增强免疫细胞功能和促进细胞因子表达、诱导JAK-STAT信号通路编码多种抗病毒蛋白等环节作用于HBV复制、转录等重要生物学过程，从而发挥免疫调节和抗病毒的双重作用。干扰素的抗HBV疗效主要受病毒和宿主的影响。
近年来，越来越多的研究也发现，肠道菌群在维持宿主免疫稳态方面起着至关重要的作用。肠道菌群的组成变化可能会影响宿主对HBV的免疫反应，从而影响慢性HBV感染的进展并促进HBV相关肝脏疾病的发展。益生菌的应用益于恢复肠道菌群失调，增加有益细菌的数量，通过益生菌重组肠道菌群可能为HBV感染患者的成功治疗提供新思路。既往研究表明，poly（I:C）在体外激活鼠肝细胞产生干扰素并抑制 HBV复制。然而，肠道菌群如何调节IFN的抗病毒免疫反应仍不清楚。因此，我们旨在研究肠道菌群在 IFN治疗慢性乙型肝炎疗效中的作用及其潜在机制。
本研究通过予以C57BL/6J小鼠尾静脉注射AAV8-HBV建立HBV 持续感染模型，评估肠道菌群耗竭后poly（I:C）抗病毒反应的影响；利用万古霉素、新霉素、甲硝唑三联抗生素混合液构建HBV复制伪无菌小鼠模型（PGF）研究肠道菌群对干扰素抗HBV作用的影响；最后利用进行粪群移植（FMT）的PGF小鼠用于验证肠道菌群或益生菌在 poly（I:C）治疗CHB中的作用。
本研究首先发现 poly（I:C）可明显抑制 C57BL/6小鼠中HBV的复制。poly（I:C）作用的HBV复制小鼠血清中HBsAg/HBeAg及HBV DNA在第60天内消失，HBV复制中间体和HBsAg/HBcAg也可在肝细胞中被消除。poly（I:C）作用于PGF小鼠后结果显示，poly（I:C）对HBV复制的抑制作用在肠道菌群耗竭的PGF小鼠中减弱，而FMT或者加用益生菌后可以提高poly（I:C）在 PGF 小鼠中的抗HBV作用。此外，我们的研究发现PGF小鼠中T细胞抗病毒功能受损，表现为Th1型细胞因子（IL-2、IFN-γ、TNF -β）下调而Th2 型细胞因子（IL-4、IL-6、IL-10）的分泌上调。最后，我们的研究发现通过粪群移植或加用益生菌可明显改善PGF小鼠中Th1及Th2细胞因子的分泌情况。
该项研究结果表明，肠道菌群在HBV小鼠模型中调节poly（I:C）介导的HBV抑制，FMT或益生菌可通过改善免疫反应来增强IFN的抗HBV复制作用。联合肠道菌群的调节或可作为未来提升干扰素疗效，促进患者获得临床治愈的新途径。
研究二
褪黑激素通过调控Nrf-2/Keap-1信号通路减轻肝纤维化（大会摘要1438）
肝纤维化的持续进展会导致肝硬化的发生，大大增加肝细胞癌的发病风险并影响患者寿命。对肝纤维化患者进行早期干预，防止肝纤维化逐渐向肝硬化转变至关重要。尽管肝纤维化相关研究开展了多年，但临床上仍缺乏有效的抗肝纤维化治疗方案。寻找一种创新、安全并能有效地阻止甚至能逆转肝纤维化的治疗方法，有重要的临床价值。
褪黑激素（Melatonin，MT）作为松果体分泌的多功能胺类激素，具有抗氧化、抗炎和抗肺纤维化的作用。研究发现，MT受体在人类肥厚性瘢痕组织的成纤维细胞中过度表达，而在正常皮肤中无明显表达，表明了MT可以调节瘢痕形成和纤维化。最近也有研究在大鼠的肝脏中发现了MT受体，提示肝脏有受MT调节的分子基础。然而，其在肝脏中的抗纤维化作用及其详细机制仍不确定。
本研究利用四氯化碳诱导的小鼠肝纤维化模型和转化生长因子-β刺激的肝星状细胞（LX2细胞系）模型，在体内外研究MT的作用及其潜在机制。获取小鼠肝组织用于HE染色和Masson染色观察组织结构改变和纤维化程度，并采用酶联免疫吸附法测定小鼠血清ALT和AST。随后，通过q-PCR、Western blot和免疫组织化学染色检测肝组织中相关因子的mRNA和蛋白的表达水平。与此同时，使用q-PCR和Western blot检测细胞水平相关因子的mRNA和蛋白表达情况。
研究结果提示：与模型组肝脏相比，在肝纤维化小鼠模型中，MT的预防性和治疗性给药均导致小叶间隔增宽减弱和蓝色胶原纤维在肝组织门静脉区域的沉积减少。同时，预防性使用MT可改善小鼠肝功能ALT和AST水平。MT通过在体内下调α-平滑肌肌动蛋白（Alpha-smooth muscle actin，α-SMA)（一种纤维化的代表性指标）显示出对肝纤维化的有效改善作用。在用MT处理活化的LX2后，也发现细胞中a-SAM的表达减少。此外，体内和体外实验均证实MT可以上调Nrf-2和下调Keap-1表达，参与调控Nrf-2/Keap-1信号通路。
该项研究结果提示，MT可能通过调节Nrf-2/Keap-1信号通路降低肝星状细胞的活化，从而在肝组织中发挥抗纤维化作用，MT可以作为纤维化预防和治疗的候选临床药物，帮助慢性肝病患者改善长期预后。
参考文献：
1. Duoduo Lv, Lingyun Zhou, Hong Tang. Gut Microbiota Modulates the Antiviral Immune Response of poly（I:C）to Interferon-Dependent Inhibition of Hepatitis B Virus. AASLD 2022 Abstract 1200
2. Wei Huang, Lingyao Du, Hong Tang. Melatonin Attenuates Liver Fibrosis Through Nrf-2/Keap-1 Signaling Pathway. AASLD 2022 Abstract 1438
专家简介
唐红教授
博士生导师，国家杰出青年基金获得者
四川大学华西医院感染性疾病中心学科主任
生物治疗国家重点实验室感染性疾病研究室主任
中华医学会感染病学分会副主任委员
中国医师协会感染科医师分会副会长
四川省医学会肝病专委会主任委员
四川省医学会感染病专委会主任委员
四川省医师协会感染科医师分会候任会长
四川省医学会感染病专委会艾滋病学组组长
往期回顾
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